Introducción al Procesamiento de Tejidos

Definición
El “procesamiento de tejidos” se refiere a la serie de pasos necesarios para preparar tejido animal o humano, desde la fijación inicial hasta la infiltración completa con parafina histológica adecuada, permitiendo su seccionamiento en un microtomo.

Importancia del Procesamiento de Tejidos
Un programa de procesamiento inadecuado o errores fundamentales, como la reposición o secuenciación incorrecta de reactivos, pueden impedir que las muestras sean seccionables y no proporcionen información diagnóstica útil. Esto es crítico en tejidos humanos de diagnóstico, donde las muestras suelen procesarse en un solo lote. Si el tejido se daña, puede no haber material de repuesto, y el laboratorio deberá explicar al paciente por qué no se pudo realizar un diagnóstico.

Aunque pueden ocurrir fallas mecánicas o eléctricas en las máquinas automáticas de procesamiento de tejidos, la mayoría de los problemas se deben a errores humanos. Por lo tanto, es fundamental capacitar adecuadamente al personal y configurar cuidadosamente los programas de procesamiento.

Resumen de los Pasos de Procesamiento de Tejidos para Secciones de Parafina

1. Recolección de muestras frescas
   Las muestras deben manipularse con cuidado y fijarse lo antes posible tras la extracción, idealmente en el sitio de obtención. Si esto no es factible, deben fijarse inmediatamente al llegar al laboratorio.

2. Fijación
   Las muestras se sumergen en un fijador líquido, como formalina tamponada con fosfato. Este agente penetra el tejido, induce cambios químicos y físicos que lo endurecen y preservan. El tiempo de fijación suele ser de 6 a 24 horas, dependiendo del tamaño y tipo de tejido. Posteriormente, las muestras se colocan en casetes etiquetados para su procesamiento.

3. Deshidratación
   La cera de parafina fundida es hidrófoba, por lo que es necesario eliminar la mayor parte del agua del tejido antes de la infiltración. Este proceso se realiza sumergiendo las muestras en una serie de soluciones de alcohol de concentración creciente, culminando en alcohol absoluto. Para muestras de hasta 4 mm de grosor, una secuencia típica puede ser:

• 70% etanol – 15 min

• 90% etanol – 15 min

• 100% etanol – 15 min

• 100% etanol – 15 min

• 100% etanol – 30 min

• 100% etanol – 45 min
  El objetivo es eliminar toda el agua, excepto pequeñas cantidades fuertemente unidas a nivel molecular.

1. Aclaramiento/Limpieza
   Se utiliza un disolvente intermedio compatible con alcohol y parafina, como xileno, que reemplaza el alcohol en el tejido y elimina la grasa que impediría la infiltración de cera. Para muestras de hasta 4 mm, una secuencia típica es: xileno 20 min, xileno 20 min, xileno 45 min.

2. Infiltración con cera
   El tejido se impregna con parafina histológica líquida a 60 °C, que luego se enfría a 20 °C para solidificarse y permitir secciones finas de hasta 2 µm sin perder integridad ni flexibilidad. Para muestras de hasta 4 mm, una secuencia típica es: cera 30 min, cera 30 min, cera 45 min. La composición de la cera incluye parafina purificada y aditivos como resinas que garantizan la capacidad de corte y la formación de cintas durante el corte en microtomo.

3. Incrustación/Bloqueo
   Las muestras infiltradas se colocan en moldes con cera fundida en un centro de incrustación, cuidando la orientación para definir el plano de seccionamiento. Luego se agrega más cera y se coloca todo en una placa fría para solidificar. Una vez sólido, el bloque con el anillo de incrustación está listo para microtomía y puede conservarse como material de archivo duradero.